培養皿通常使用固體培養基制成平板培養(就是平板皿名稱的由來)，平板培養基制作是將已裝好的滅菌瓊脂培養基，用溫水(無菌)溶化，取下試管棉花塞，管口于酒精燈火焰上通過，然后微啟滅菌的培養皿蓋，使試管口能深入為宜，傾入培養基后即可蓋密，再輕輕地搖勻傾入的培養基，使之均勻地分布于皿底上凝結，即得平板培養基。由于細菌的繁殖、發育生長是與所供給的培養基(營養)有直接關系，尤其是作定量檢驗分析，對提供營養物的多少，有決定意義。細菌培養時對營養提供的多秒、是否均勻，培養皿皿底是否平整極為重要，如培養皿皿底不平，瓊脂的培養基分布將隨培養皿皿底是否平整有厚有薄，薄的部分營養供給就不足，這對定量分析有著密切關系，故對定量培養皿皿底要求特別平整拜原因所在。但作一般定性(檢驗細菌、菌落生長、繁殖等)，使用普通培養皿即可。