細胞爬片實驗的步驟說明

發布日期： 2018-08-24

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　　細胞爬片實驗的步驟說明

　　細胞爬片免疫熒光實驗步驟

　　天：

　　1.在培養板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

　　2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min，PBS浸洗玻片3次，每次3min；

　　3.0.5%Triton X-100(PBS配制)室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；

　　4.PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min；

　　5.吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜；

　　第二天：

　　6.加熒光二抗：PBST浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；

　　注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。

　　7.復染核：滴加DAPI避光孵育5min，對標本進行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；

　　8.用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。

　　細胞爬片抗原修復液是一種特別適合用于細胞爬片的快速抗原修復液，只需室溫孵育5分鐘即可完成對細胞爬片樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復。

　　使用說明：1，細胞爬片固定后用PBS洗滌3次，每次5min。2，加入抗原修復液使其覆蓋住細胞爬片，室溫孵育5min。3，PBS洗滌細胞爬片，重復3次，每次5min。充分洗滌殘留的SDS，以免造成抗體失去活性。4，封閉液封閉細胞爬片。5，隨后即可進行一抗孵育等后續的免疫染色步驟。

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